A maior dificuldade na clonagem de um gene que é a identificação dos clones que contêm o DNA de interesse, pode ser resolvida utilizando-se técnicas de hibridização dos ácidos nucléicos, nas quais moléculas de DNA e de RNA formam compostos fita dupla estáveis através do pareamento de bases. Em relação à hibridização de sondas em DNAs alvo, é correto afirmar que:
Em condições de estringência severas, com altas temperaturas, ou com baixa concentração de sais, não ocorre pareamento de bases, mesmo que as seqüências sejam perfeitamente complementares.
Para que ocorra hibridização, ou pareamento, as sondas utilizadas devem ser perfeitamente complementares, independentemente do grau de estringência utilizados.
Na hibridização de colônias de bactérias, em meio de cultura sólido, as bactérias são tratadas com álcali por 5 minutos. Em seguida, acrescenta-se à superfície do meio, as sondas marcadas com radioativaidade e incuba-se para que haja hibridização.
O relaxamento nas condições de estringência pode levar a imperfeições no pareamento entre as fitas. Embora haja perda da especificidade, esse procedimento permite detectar seqüências parcialmente similares.
Navegue em mais questões
{TITLE}
{CONTENT}